ПЦР-диагностика

ПЦР-диагностика: область применения и суть, плюсы и минусы диагностирования, подготовка к сдаче, болезни выявляемые при полимеразной цепной реакции

ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция) применяется для выявления активной стадии заболевания в комплексе с уже традиционными исследованиями, когда нет реакции иммунологическими и микробиологическими методами диагностики.

[list h2 h3]

Определенный период ПЦР-диагностику применяли только в научных целях, и только начиная с конца XX века и начала 21-го этот анализ стал своеобразным «золотым стандартом», приносящим большую пользу в различных областях медицины.

В чем суть ПЦР-диагностирования?

ПЦР-диагностика, в отличие от иммуноферментного анализа, способного обнаружить следы пребывания антител (АТ), устанавливает не только первопричины патологического состояния, но и выявляет наличие возбудителя инфекции на специфическом определённом участке ДНК или РНК при помощи ферментов в лабораторных условиях.

Анализ методом ПЦР имеет высокую точность, исключая возможность ложных реакций и совершенно необязательно брать кровь из вены на исследование, достаточно небольшого количества образцов ткани, биологической жидкости.

К вышеперечисленному варианту биологической среды материала для тестирования, содержащего предполагаемый инфекционный возбудитель по решению врача могут быть назначено несколько вариантов сразу, в том числе это может быть:

  • мазок (выделения из половых органов);
  • соскоб со слизистой (рта, носа, половых органов);
  • слюна, мокрота или плевральная жидкость;
  • сок простаты, исследование секрета предстательной железы на наличие вредителя;
  • плацентарная ткань или околоплодная жидкость;
  • общий анализ мочи на исследование осадка (после центрифугирования) при необходимости выявления микобактерий туберкулеза;
  • спинномозговая жидкость на предмет выявления инфекционного поражения ЦНС;
  • забор клеток или тканей (биоптата) из печени, двенадцатиперстной кишки, желудка и пр.

Данные образцы помещаются в специальный реактор и анализируются при многократном удвоении (амплификации) исследуемых фрагментов ДНК, путём повторных циклов репликации и денатурации с добавлением специфических ферментов для синтеза. По типу цепной реакции данный метод идентифицирует вид и индивидуальные характеристики ДНК или РНК патогена. В конечном итоге процесс проведения ПЦР при сравнительном анализе клонированного генетического материала позволяет выявить даже единичные клетки живого вируса, легко отличая уреаплазму от микоплазмы или же хламидии.

Преимущества и недостатки ПЦР-диагностики

У этого ПЦР-диагностики есть как преимущества, так несколько недостатков.

Преимущества диагностики:

  • определение возбудителя даёт прямое указание на наличие в генетическом материале нетипичного участка ДНК или РНК;
  • ПЦР диагностика дает 100% точности благодаря присутствию в исследуемом материале частиц нуклеиновых кислот (фрагменты ДНК или РНК) характерных только конкретному вирусу или бактерии;
  • высокая чувствительность ПЦР-системы, в сравнении с иными методами диагностики. ПЦР-анализу для определения наличия возбудителя достаточно одной клетки живого вируса (10-100 клеток в пробе), что даёт возможность обнаружения патогенного микроорганизма на раннем этапе заболевания при отсутствии выраженных симптомов, и в запущенных формах;
  • высокотехнологичная автоматизированная амплификация методом ПЦР  повышает скорость выполнения анализа, проводя тестирование в день забора (выделяя не более 4-6 часов на диагностику). Это повышает производительность и даёт преобладание над культуральными методами исследования;
  • универсальность анализа позволяет с помощью генетического материала ДНК или РНК, забранного различными вариантами, обнаружить нескольких возбудителей из одной биологической пробы.

Если говорить о недостатках, то, учитывая чувствительность ПЦР-системы, одним из малоприятных моментов, являются:

  • изменчивость микроорганизмов. Недостаток состоит в том, что микроорганизмам присуща мутация, приводящая к изменению исследуемого генотипа возбудителя. И тест-система ПЦР в амплифицируемом участке генома не может уловить гибрид уже эволюционирующего возбудителя, так же как и иммунная система человека не распознает его, поэтому реакции на определение наличия инфекционного заболевания не произойдёт. Но для этого проходят различные разработки для усовершенствования метода ПЦР;
  • возможность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата. Чтоб не столкнуться с ложными результатами на одном из этапов ПЦР-диагностики, её нужно проходить внимательно, без нарушения процесса, соблюдая правила забора материала. Образцы могут поменять свою структуру или вовсе разрушиться, что может привести к ложноотрицательному или ложноположительному результату.  Следует понимать, что такой результат может быть, когда инфекция уже убита, но мертвые клетки ещё не успели обновиться и при клонировании были учтены. Поэтому на ранних сроках после проведённого лечения применяют другие методы (например, БАК-посев), а уже после полного выведения из организма неактивных возбудителей инфекции проводиться анализ-контроль методом ПЦР. И уже лечащий врач принимает окончательное решение о целесообразности терапии, взяв во внимание все аргументы «за» и «против».

Подготовка к ПЦР-диагностике и условия сдачи анализов

Обратить внимание стоит на простую подготовку к ПЦР, для этого необходимо строго выполнить все рекомендации лечащего врача и соблюдать минимум несколько неоспоримых условий для более точного результата.

В зависимости от метода забора материала на обследование необходимо помнить, что:

  • для диагностики с помощью венозной крови пациенту необходимо сдавать анализ натощак, исключая даже употребление жидкости;
  • для сдачи мазка необходимо воздержаться от полового контакта как минимум на пару суток, допускается провести гигиену половых органов с вечера, но не в день сдачи анализа. Стоит выбрать оптимальное время для проведения исследования с учетом: за два дня до или после менструального цикла;
  • для любого метода забора материала следует прекратить за пару недель до сдачи применение антибактериальных лекарственных препаратов, предварительно проконсультировавшись с лечащим врачом, поскольку это может повлиять на достоверность результата;
  • для сдачи анализа мочи на определение наличия возбудителей необходимо не только соблюдать стерильность и гигиеничность, но и качественность собранного материала для исследования, несущего более точную информацию. Поэтому допустимо выдержать 2-3 часа с последнего мочеиспускания до сбора мочи или использовать утренний образец, дающий большую вероятность показать наличие воспалительного процесса.

Применение ПЦР и выявляемые заболевания

Для поиска возбудителей многих заболеваний не следует игнорировать вышеупомянутые рекомендации, а назначенное обследование врачом именно методом ПЦР-диагностики может обезопасить от серьёзных осложнений не только взрослого человека, но и маленького, ещё не родившегося, ребёнка в утробе матери.

[su_youtube_advanced url=»https://www.youtube.com/watch?v=CY3qc0GdvoA» width=»560″ https=»yes»]

Ведь чаще некоторыми типами вирусов (ВПЧ) страдает именно женская половина населения, существенно увеличивая возможность возникновения рака шейки матки или бесплодия. И, ввиду возможного негативного влияния на течение беременности и на развития плода, следует учитывать, что разнообразные группы микроорганизмов, передаваемых половым путём или при иммунодефиците трудно отнести к той или иной группе возбудителя, так как они очень взаимосвязаны  (например, ТОРЧ-инфекции и ИППП). Зато полимеразная цепная реакция способна найти чужеродную структуру, определив конкретный тип вирусного ДНК в женском организме.

Расшифровка результатов анализа позволяет подтвердить или опровергнуть наличие болезней. Охватывая большой спектр возбудителей такой анализ очень актуален для своевременного выявления многих инфекций, таких как:

  • обнаружение ВИЧ-инфекции. Тяжёлого нарушения иммунитета инфекцией, поражающей в первую очередь иммунокомпетентные клетки, имеющиеся на поверхности иммунной системы на рецепторах СD4, впоследствии теряющих свою возможность защищаться от инфекций, и перестают реагировать на присутствие  в плазме крови РНК вируса. В случае положительного результата при анонимном обследовании, его проходят повторно с добавлением дополнительных исследований;
  • вирусные гепатиты, чаще всего — гепатита С (содержащего РНК возбудитель), который в силу своей легкой переносимости трудно диагностировать иными методами, ведь ПЦР-метод является более оптимальным для распознания возбудителя в крови или биоптате печени. Острый гепатит проявляет себя на поздней стадии, формируя злокачественный воспалительный процесс. Однако стоит учесть, что если при сдаче анализа на наличие антител в крови (АТ) результат будет положительный, а ПЦР-анализ даст результат отрицательный, это может говорить о наличие вируса в организме в очень низком количестве, либо поражённые клетки находятся в ожидающей стадии в геноме клеток печени без выхода в кровяное русло. В таком случаи будет проводиться ряд повторных исследований для окончательного диагноза и методики лечения;
  • онкогенные вирусы, такие как ВПЧ (вирус папилломы человека) имеющих более 100 различных типов вируса, передающийся половым путём или во время медицинских манипуляций, через родовые пути проходит заражение новорожденного от матери, если она носитель папилломавирусной инфекции;
  • ИППП (инфекции, передающиеся половым путем);
  • подходит для выявления всех ЗППП (уреаплазмоз и микроплазмоз, гарднереллез, хламидиоз, трихомониаз) и ТОРЧ-инфекций;
  • с большой степенью точности указывает на наличие инфекции мононуклеоза, характеризующегося поражением лимфатической и ретикулоэндотелиальной системы (увеличением лимфатических узлов, селезёнки, печени), можно выявить с помощью ПЦР-диагностики, взяв в качестве исследуемого материала сыворотку крови. Болезнь Филатова по внешним параметрам может проявиться как высыпания, желчность кожного покрова, белый налёт на языке.
  • цитомегаловирусная инфекция, проникающая в кровь больных СПИДом и перенёсших трансплантацию органов с применением препаратов для подавления иммунитета;
  • герпетическая инфекция, представляя из себя тот или иной тип герпеса, способного поразить половые органы, слизистую оболочку глаз или кожный покров;
  • туберкулез. При наличии основных симптомов болезни назначается прохождение ПЦР-анализа после результатов бронхоскопии, позволяя диагностировать активную стадию туберкулёза гораздо быстрее, чем с помощью бактериологического или бактериоскопического метода;
  • вирусное инфекционное заболевание, такое как клещевой энцефалит (Боррелиоз). Характеризуется поражением клеток нервной системы, интоксикацией, воспалением головного мозга и впоследствии развитием паралича. Для обнаружения антигена с помощью ПЦР-диагностики для выделения РНК-вируса берётся кровь и спинномозговая жидкость.
  • выявление хеликобактерной инфекции (приводящая к хроническому гастриту, язвенной болезни, опухоли желудка) методом ПЦР-диагностики позволяет обнаружить ДНК (генетический материал) хеликобактер пилори в биоптате, кале, слюне, различая штаммы патогенных бактерий по степени злокачественности.

ПЦР-диагностика инфекций развивается ускоренными темпами и успешно используется в онкологии, гинекологии, урологии, гастроэнтерологии, вирусологии и список постоянно пополняется, но не ограничивается только поиском возбудителей инфекционных заболеваний. Среди остальных практических применений ПЦР-метода можно также выделить использование исследования для установления отцовства и идентификации личности.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!:

Adblock detector